1、層流手術室操作環境清潔、寬敞
(1)操作環境應清潔、寬敞、定期消毒;
(2)操作臺清潔、干燥、平坦、物品布局合理;
(3)無菌操作前半小時應停止清掃工作，避免塵埃飛揚。
2、工作人員儀表符合規范無菌（fungus)操作前，工作人員應戴好帽子和口罩，修剪指甲并洗手，必要時穿無菌衣、戴無菌手套。無菌手術室裝修采用空氣潔凈技術對微生物污染采取程度不同的控制，達到控制空間環境中空氣潔凈度適于各類手術之要求；并提供適宜的溫、濕度，創造一個潔凈舒適的手術空間環境。由于手術室要嚴格控制低細菌數及低麻醉氣體濃度，所以層流超凈裝置的穩定性是層流凈化手術室的重要驗收指標。
3、明確層流手術室基本概念，進行無菌(意思:沒有活菌)（fungus)操作時，應首先聲明無菌區、非無菌區、無菌物品的概念。
4、層流手術室物品放置有序，標志明顯
(1)無菌(意思:沒有活菌)（fungus)物品必須與非無菌物品分開放置，并且有明顯的標志。
(2)無菌（fungus)物品不可暴露與空氣中，應存放于無菌容器內。
(3)無菌(意思:沒有活菌)包外表需表明物品名稱、滅菌日期，并按失效期先后順序擺放。無菌手術室裝修采用空氣潔凈技術對微生物污染采取程度不同的控制，達到控制空間環境中空氣潔凈度適于各類手術之要求；并提供適宜的溫、濕度，創造一個潔凈舒適的手術空間環境。由于手術室要嚴格控制低細菌數及低麻醉氣體濃度，所以層流超凈裝置的穩定性是層流凈化手術室的重要驗收指標。
(4)無菌包的有效期為7天，過期或受潮(shòu cháo)應重新滅菌。
(5)一套無菌(意思:沒有活菌)（fungus)物品只供一位患者使用一次。
5、層流手術室操作中的無菌（fungus)(意思:沒有活菌)觀念
(1)進行層流手術室無菌操作時，操作者身體應與無菌去保持一定的距離;
(2)取放無菌(意思:沒有活菌)物品時，應面向無菌區;
(3)取用無菌(意思:沒有活菌)物品時應使用無菌持物鉗;
(4)手臂應保持在腰部或治療臺面以上，不可跨越無菌（fungus)區，受不可接觸無菌物品;
(5)非無菌(意思:沒有活菌)物品應遠離無菌區，無菌物品一經取出，即使未用，也不可放回無菌容器內。
(6)如無菌（fungus)物品疑有污染或已被污染，應予更換并重新滅菌。無菌手術室凈化同級別的層流手術室其空氣潔凈度標準不同，例如國內標準I級層流手術室的標準為潔凈度5級，每立方尺空氣中≥0.5μm的塵粒數，≤100顆或每升空氣中≤3.5 顆。II級層流手術室的標準為潔凈度6級，每立方尺空氣中≥0.5μm的塵粒數，≤1000顆或每升空氣中≤35顆。
層流手術室是采用空氣潔凈技術對微生物污染采取程度不同的控制（control)，以達到控制空間環境中空氣潔凈度適于各類手術之要求;并提供適宜的溫、濕度，創造一個清新、潔凈、舒適、特殊結構:莢膜、鞭毛、菌毛數低的手術空間環境，使病人在手術時組織受到盡可能少的損傷，并大大減低感染率，尤其是顱內手術和燒傷手術，保證病人術后能更快更好地恢復。
